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外周血淋巴细胞疏散管

本品接纳密度梯度离心法,凭据细胞密度差别,借助疏散液和离心,进行细胞疏散纯化。细胞疏散液爆发一定水平的密度梯度,经离心后,红细胞、粒细胞沉于管底;PBMC(单个 核细胞,包括淋巴细胞和单核细胞等)漂浮于疏散液的液面上,目的细胞保保存设计的嵌套之上,疏散管中奇特的嵌套,能够最洪流平的减少目的样品和密度阶梯介质的混淆,最后只需从离心管中简单倾倒,而无需其他技术性的专业操作。

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使用要领/ Instructions

前期准备

1) 将疏散液的温度平衡至室温(RT),避光。

2) 将疏散液用移液管从疏散管嵌套的中心孔中加入:15ml的疏散管需要加入约4ml疏散液;50ml的疏散管需要加入约13ml疏散液,确保疏散液笼罩嵌套上方。

3) 平衡至室温后的疏散管就可以加入抽取的抗凝血和骨髓了。虽然加入稀释标本的生理盐水不是十分须要,可是它能资助提高疏散效果。

疏散历程

加入细胞疏散液                                   加入样本                             离心后分层          收集富集细胞、重复洗涤


1) 将抗凝样本(血或骨髓,如果需要可以用生理盐水稀释)延管壁缓慢倒入或用移液管延管壁缓慢加入到疏散管中:如果用15ml的疏散管建议使用4-9ml样本;如果用50ml的疏散管建议使用13-30ml样本。
2) 室温下离心,离心力为1200 x g需要10分钟,关闭离心机。关于安排24h以上的样品,建议离心时间加长。
3) 离心后液体疏散情况(从上到下)为:a血浆 ;b富集的细胞部分(中间相包括淋巴细胞/PBMCs细胞);c疏散液;d嵌套;e沉淀(红细胞和粒细胞)。收罗或抛弃富集细胞所在层以上5到10mm的血浆层有助于避免富集细胞被血小板再次污染。
4) 收获富集细胞(淋巴细胞/PBMCs细胞),将疏散管中上清倒入另一洁净离心管中,疏散管中的嵌套能有效制止富集细胞被红细胞和粒细胞再次污染。建议不要将疏散管倒置2s以上。
5) 用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤富集细胞(淋巴细胞/PBMCs细胞),然后在250 x g离心力下离心10分钟。
6) 按办法5重复洗涤2次,最后用5ml PBS缓冲液重新悬浮细胞。


注意事项/ Cautions
1) 本产品应由经过专业培训的人员操作,并遵守良好的实验室规范。
2) 请勿重复使用疏散管。
3) 由于各品牌离心机的性能差别,地区温度情况差别,可能影响疏散效果,用户可以调理离心转速和离心的时间,摸索最佳的疏散条件(具体疏散条件由各实验室自定)。
4) 可用于人类外周血、骨髓和脐带血样本。它不适用于白细胞疏散样本、血沉棕黄层样本或凌驾48小时的样本。
5) 离心后,细胞可能聚集在富集层以上的疏散管的管壁上。这种聚合是正常的,受样实质量、样本安排时间和抗凝剂类型的影响。此聚合与疏散管的使用无关。细胞可以通过使用移液管尖端刮管壁的一侧来清除。
6) 处理任何生物来源的标本,使用采血针、采血管系列、相关仪器等一定要注意按严格的操作规程使用。请把标本当成可能熏染 HIV、HBV、HCV等熏染病的危险物质处理。为制止操作时熏染的危险,请使用一次性手套。


相关工具
  • 产品手册
  • 产品单页
  • 操作手册
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  • 常见问题解答
  • NEST-外周血淋巴细胞疏散管
    更新日期:2023-06-09
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