PBMC（peripheral
blood mononuclear cell），外周血单个核细胞，其主要细胞类型为血液里具有单个核的细胞，主要包括淋巴细胞（Ｔ＼Ｂ），单核细胞，吞噬细胞，树突状细胞和其他少量细胞类型，其中淋巴细胞占很大一部分。疏散ＰＢＭＣ的主要目的是为了将多核细胞和红细胞去除，从而能够很便当地模拟体外的血液免疫情况。从血液制备PBMC是疏散特定免疫细胞亚群之前常见的一个办法。最常用的PBMC分选要领是使用密度梯度离心液进行离心。
工具/原料
要领/办法
1. 将疏散液用移液管从疏散管嵌套的中心孔中加入：15ml的疏散管需要加入约4ml疏散液 ；50ml的疏散管需要加入约13ml疏散液，确保疏散液笼罩嵌套上方。
2. 将抗凝样本沿管壁缓慢倒入或用移液管沿管壁缓慢加入到疏散管中。
3. 室温下离心10min，离心力为1200 x g。
4. 收获PBMC细胞，将疏散管中上清倒入另一洁净离心管中，疏散管中的嵌套能有效制止红细胞和粒细胞再次污染。（注意：离心后倾倒收获细胞前，也可先吸取收罗或抛弃最上层血浆层，有助于减少细胞被血小板污染。）
5. 用PBS洗涤PBMC细胞，在250 x g离心力下离心10min。
6. 按办法5重复洗涤2次，用5ml PBS缓冲液重悬细胞。
离心后液体疏散情况（从上到下）：a血浆层 ；b富集的细胞部分（PBMCs） ；c疏散液 ；d嵌套 ；e沉淀（红细胞和粒细胞）。
注意事项
1. 可用于人类外周血、骨髓和脐带血样本。不适用于血凝等异常样本或凌驾48小时的样本。
2. 15ml的疏散管建议使用4-9ml样本 ；50ml的疏散管建议使用13-30ml样本。
3. 关于安排24h以上的样本，建议离心时间加长。
4. 离心后收获细胞前，也可先吸取收罗或抛弃最上层血浆层，有助于避免被血小板污染。
5. 离心后倾倒上清时不要将疏散管倒置2s以上。
6. 疏散管请勿重复使用。
7. 离心后，细胞可能聚集在富集层以上的疏散管的管壁上。这种聚合是正常的，受样实质量、样本安排时间和抗凝剂类型的影响。此聚合与疏散管的使用无关。细胞可以通过使用移液管尖端轻刮聚集团的一侧来清除。
