实验质料：
基础培养基
血清（通例为FBS/NBS）
无菌PBS磷酸盐缓冲液
电动移液枪
移液枪
超净事情台
无菌二甲基亚砜（DMSO）
针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]
杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST]
15mL、50mL无菌离心管[NEST]
程序降温盒[NEST]
PET/PETG方形试剂瓶[NEST]
移液管[NEST]
自动旋盖机[NEST]
盒装无菌吸头[NEST]
实验准备：
冻存液准备：
一般的细胞：55%基础培养基+40%牛血清（FBS/NBS）+5%DMSO
重要的细胞：90%牛血清（FBS/NBS）+10%DMSO
冻存液配置完成后，15ml离心管分装，4℃条件下贮存备用。若配置量较大，可分装入50ml离心管，-20℃条件下冷冻贮存。（若牛血清内保存析出沉淀物，接纳0.22μm 滤膜过滤除菌）
使用前37℃水浴加热
待冻存细胞：
使细胞冻存前，选择细胞生长状态良好，且处于对数生恒久的细胞，冻存前12~24h换新鲜培养基维持细胞状态。
实验流程：
视察待冻存细胞密度，约为80%~90%。用移液枪吸出陈腐培养基，加入无菌PBS清洗细胞1-2次，去除培养情况中的残留培养基。
加入适量对应胰酶或消化液，使胰酶没过细胞，放入培养箱消化。显微镜下视察细胞状态，胞质回缩，细胞间不再连接成片，此时加入完终止液终止消化。
用吸头轻轻奏乐细胞，形成细胞悬液，将细胞悬液1000rpm，离心3-5min。抛弃上清，加入适量预先配制好的冻存液，轻轻奏乐使细胞均匀并计数。用冻存液调理的细胞密度，使之终密度为5×106/ml～1×107/ml。
用移液枪凭据预计容量，分装入细胞冻存管[NEST]中，接纳自动旋盖机[NEST]旋盖密封。
标准的冻存程序为降温速率况处-1℃～-2℃/ min，可将待冻存细胞凭据以下办法逐步冻存：室温→4℃（20min）→-20℃（30min）→-80℃（留宿）→液氮恒久生存。
也可将待冻存放入程序降温盒[NEST]，直接-80℃留宿，再转移至液氮生存。
使用到的NEST产品：
无菌二甲基亚砜（DMSO）
针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]
杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST]
15mL、50mL无菌离心管[NEST]
程序降温盒[NEST]
PET/PETG方形试剂瓶[NEST]
移液管[NEST]
自动旋盖机[NEST]
盒装无菌吸头[NEST]
