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2009 Ä꣬Hans Clevers ¼°ÆäÍŶÓÀûÓà Lgr5+ ³¦¸Éϸ°ûÔÚÌåÍâÅàÑø³öÁËÈýάС³¦ÀàÆ÷¹Ù½á¹¹¡£ÕâÖֽṹ·´Ó¦Á˳¦ÉÏƤϸ°ûµÄÉúÀí×´¿ö£¬¿É½øÐкã¾ÃÌåÍâÅàÑø£¬Í¬Ê±¼á³Öϸ°ûÆÊÎöÄÜÁ¦¡£ÕâÖÖÒªÁìÔ½À´Ô½¶àµØÓÃÓÚ¸Éϸ°ûÑо¿¡¢¼²²¡Ä£ÐͺÍÔÙÉúҽѧ¡£
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Part.01
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2. È¥³ýÍâĤ£¬ÓÃÀäµÄ PBS ³åÏ´¡£Óüôµ¶¼ô¿ª³¦¶Î£¬Ê¹³¦Ç»³¯ÉÏ¡£Óñù¶³ PBS ÇáÇáÇåÏ´¼ô¿ªµÄ³¦¶Î¡£
3. ÔÚ 50 mL ÀëÐĹÜÖмÓÈë 15 mL ¿áº® PBS¡£Óüôµ¶½«³¦¹Ü¼ô³É 1~2 mm µÄС¶Î£¬È»ºóÓà PBS ³åÏ´¡£Öظ´ÇåÏ´°ì·¨£¬Ö±ÖÁÇ峺Ϊֹ¡£
4. È¥³ýÉÏÇåÒº£¬½«×éÖ¯ËéƬÖØÐüÓÚ 25 mL ³¦ÒþÎÑÏû»¯Òº£¨º¬ 2-5mM EDTA£©ÖУ¬±ùÔ¡ 20 ·ÖÖÓ£¬È»ºóÔÚ 20 rpm Ðýת´²ÉÏÐýת 30 ·ÖÖÓ¡£È¥³ýÉÏÇåÒº¡£
5. ½«×éÖ¯ËéƬÖØÐüÓÚ 10 mL º¬ÓÐ 10% FBS µÄÀ䣨2-8¡æ£©PBS »º³åÈÜÒºÖС£Óà 70 ¦Ìm ¹ýÂËÆ÷¹ýÂËÉÏÇåÒº£¬²¢½«ÂËҺװÈë 50 mL µÄ½à¾»ÊÔ¹ÜÖС£Öظ´¹ýÂË 3 ´Î£¬ºÏ²¢ÂËÒº¡£
6. 300¡Ág ÀëÐÄ 5 ·ÖÖÓ¡£ÆúÈ¥ÉÏÇåÒº¡£
7. ½«³ÁµíÖØÐüÓÚ 10 mL PBS »º³åÈÜÒºÖС£200¡Ág ÀëÐÄ 3 ·ÖÖÓ¡£³ýÈ¥ÉÏÇåÒº¡£Èç¹ûÐü¸¡ÒºÖе¥Ï¸°û¹ý¶à£¬ÇëÖظ´ÀëÐÄ°ì·¨¡£
Part.02
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1. È¡ 10 ¦ÌL ϸ°ûÑù±¾£¬ÔÚÏÔ΢¾µÏ¼ÆÊýÒþÎÑ¡£200¡Ág ÀëÐÄ 3 ·ÖÖÓ£¬È¡³öÉÏÇåÒº¡£
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2. ½«ÒþÎÑÖØÐüÔÚ³¦ÀàÆ÷¹ÙÍêÈ«ÅàÑø»ùÖУ¬Ã¿Î¢ÉýÅàÑø»ùº¬ 8-20 ¸öÒþÎÑ¡£ÖÆ×÷ÍêÈ«ÅàÑø»ùʱ£¬¼ÓÈ룺
3. È¡ 150 ¦ÌL ÒþÎÑÐü¸¡Òº£¬ÓëµÈÌå»ýδϡÊ굀 GelNestTM ÀàÆ÷¹ÙרÓûùÖʽº£¨NEST 211272£©»ìÏý£¬È»ºóÇáÇáµØÓÃÒÆÒº¹ÜÉÏÏÂÒƶ¯Ê®´Î£¬Ê¹Æä³ä·Ö»ìÏý¡£
4. ½« 50 ¦ÌL ÑùÆ·¼ÓÈëÔ¤ÈÈºÃµÄ 24 ¿×°åµÄÿ¸ö¿×µÄÖÐÐÄ£¬ÐγÉÔ²¶¥×´½á¹¹¡£ÖÆÖ¹ÐγÉÆøÅÝ¡£
5. ½«Æ½°åÖÃÓÚ 37¡æ£¬¾²Öà 10 ·ÖÖÓ£¬Ê¹»ùÖÊÄý½ºÄý¹Ì¡£Ð¡ÐÄ´¦Àíƽ°å£¬ÖÆÖ¹×ÌÈÅÄý½º¡£
6. СÐĵØÏòÿ¸ö¿×ÖмÓÈë 500 ¦ÌL ÊÒΣ¨15-25¡æ£©ÀàÆ÷¹ÙÅàÑø»ù£¬´Ó²àÃæµ¹ÈëÒÔÖÆÖ¹ÈŶ¯Äý½º¡£
Part.03
ÀàÆ÷¹ÙÅàÑøÓëÊÓ²ì
1. ¼à²âÀàÆ÷¹ÙµÄÉú³¤¡£Í¨³££¬ÔÚÅàÑø 3 Сʱ×óÓÒ£¬ÒþÎÑÐγÉÇòÐνṹ¡£2-4 Ììºó£¬ÀàÆ÷¹Ù¿ªÊ¼³öÑ¿£¬µ½µÚ5-7 ÌìÐγÉÅÓ´ó½á¹¹¡£
2. µÚ¶þÌìÍêÈ«¸ü»»ÅàÑø»ù¡£Ð¡ÐÄÈ¥³ý¿×±ßÑصľÉÅàÑø»ù£¬¼ÓÈë 500 ¦ÌL ÐÂÏʵÄÊÒÎÂÀàÆ÷¹ÙÅàÑø»ù¡£
3. °´ÆÚÔÚµ¹ÖÃÏÔ΢¾µÏÂÊӲ쳦ÀàÆ÷¹Ù²¢¼Í¼¡£
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5.ʹÓÃNESTÃâ·ÑµÄÀàÆ÷¹ÙAI´óÄ£ÐÍÆÊÎöÈí¼þ½øÐÐʶ±ðÅúÁ¿¡¢ÎÞ±ê¼ÇÆÊÎöÓÉÏÔ΢¾µ»ñÈ¡µÄÀàÆ÷¹ÙÕÕƬ£¨²»ÏÞÏÔ΢¾µÆ·ÅÆ£©£¬×ÊÖúÄú¸ü¿ì¡¢¸ü׼ȷµÄ»ñµÃÀàÆ÷¹ÙµÄÊýÁ¿¡¢´óС£¨Ãæ»ý£©¡¢Ô²¶È¡¢Öܳ¤¡¢»Ò¶ÈÖµ£¨¿Éͳ¼ÆÓ«¹âÕÕƬµÄ²î±ðÀàÆ÷¹Ù/ϸ°ûÇòµÄÓ«¹âÇ¿¶È£¬»òÃ÷³¡ÕÕƬµÄÀàÆ÷¹ÙÁÁ¶È£¬´Ó¶ø·´Ó¦ÀàÆ÷¹ÙµÄËÀ»î״̬£©µÈ²ÎÊý£¬²¢Éú³Éͳ¼ÆÆÊÎö½á¹û¡£
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2024-06-18
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ͼ 3. С³¦ÀàÆ÷¹ÙµÄ½ôÃÜÁ¬½ÓÂѰ׺ÍÉÏƤϸ°ûÌØÕ÷ÂÑ°×µÄÃâÒßȾɫ½á¹û¡£
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