你只知道ELISA?
在生命科学领域多种情况下,实时、高效、经济地测定和量化样品中保存的抗原或抗体是至关重要的环节。
酶联免疫吸附实验(ELISA)已被证明是很是名贵的研究和诊断工具, 通过将已知的抗原或抗体吸附在固相载体外貌,使酶(主要是HRP)标记的抗原抗体反应在固相外貌,从而丈量生物样品中的抗体或抗原。
ELISA原理示意图
古板ELISA制止了同位素的使用,消除了宁静性的隐患,但外部条件对溶液颜色变革的影响巨大且OD值有效的线性规模过低,ELISA检测的灵敏度和动态规模大大受制于光吸收技术的缺陷。
1982年Halonen等人在J Clin Microbiol杂志上宣布了题为” Time-resolved fluoroimmunoassay: a new test for rubella antibodies” 的文章,标记着免疫检测正式跨入荧光时代,这也是DELFIA技术的原型。
简单来说,DELFIA相比古板ELISA实验有两个区别:
1. 检测抗体上的酶HRP换成镧系螯合物((Eu, Sm, Tb, Dy)标记。
2. 检测方法为荧光检测。
DELFIA原理示意图
DELFIA中用到的镧系元素是一类特殊的具有荧光性质的元素,这对实验质料——酶标板提出了要求。
绝大大都ELISA都选择透明酶标板作为作为载体和容器,但发光反应中发射出的光是各向同性的,光不但会从笔直偏向发散,还从水平偏向发散出来,很容易的就会通过透明酶标板各个孔之间的间隙和孔壁。相邻孔之间相互影响,造成结果失误。
白色的酶标板可用于较弱的光检测,常用于一般的化学发光和底物显色(如双荧光素酶报告基因剖析)。
玄色的酶标板因其自身会有光吸收,其信号要弱于白色的酶标板,一般用于检测较强的光,如荧光检测。
? 高结协力
南宫28玄色酶标板由非自荧光质料制成,外貌经处理后,其卵白结合能力大大增强,可达500ng IgG/cm2,主要结合的卵白分子量>10kD。
? 配景荧光低,可消除非特异反应带来的问题。
玄色的酶标板因其自身会有光吸收,可排除一些较弱的配景滋扰荧光。
? 可拆式设计
白色酶标板框搭配玄色酶标板条的可拆式设计更便于操作。
当需要将板条拆下时,可从板条正面两端轻轻向上掰动,然后抠取下来,如上图所示。
若板条太紧难以掰动,可用手指抵住板条底部轻轻向上顶,然后如上图将板条抠取下来。
务须要戴好无尘手套,以免污染板条而影响板条的透光性。
不可从板条的一端强行掰取,容易造成板条断裂。
在装板条时,要注意偏向,板条两端划分设计成方形和半圆形,半圆形那端必须装在有凸起台阶的卡槽内(箭头所在处),切勿装反。
将板条装入板框后,在两侧和中间部位都需要进行按压,压实后方可进行后续实验。
ELISA·DELFIA